شناسایی و بیان ژنgra۷ توکسوپلاسما گونده ای سویه rh در پلاسمید یوکاریوت بیانی pcdna۳

سابقه و هدف: توکسوپلاسموزیس از بیماری های شایع جهان است و بیشتر به علت عوارض وخیمی که در موارد مادرزادی و بیماران مبتلا به ایدز ایجاد می کند، اهمیت دارد. یکی از راه های پیشگیری از این انگل در انسان و دام استفاده از واکسن می باشد. آنتی ژن گرانولی 7 (gra7) یک آنتی ژن فشرده ترشحی 29 کیلودالتونی توکسوپلاسما گونده ای می باشد که در واکوئل پارازیتوفروس تولید شده، توسط سلول های آلوده میزبان آزاد می شود و به عنوان کاندیدای تهیه واکسن مطرح می باشد.مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی پلاسمید حاوی ژن gra7 از باکتری topo استخراج شد. سپس این پلاسمید با آنزیم های bamh1 و ecor1 برش داده شد. ژن جدا شده وارد پلاسمید pcdna3 گردید. این کلونینگ با روش های pcr و تعیین توالی تایید شد. بیان پروتئین نیز با روش های sds-page و وسترن بلات تایید شد. نتایج: نتایج نشان داد که ژن gra7 در پلاسمیدpcdna3 کلون شده است و نتایج pcr پلاسمید pcdna3 حاوی ژن gra7 قطعه bp 733 را نشان داد. بیان pcgra7 در سلول های cho با استفاده از روش های sds-page و وسترن بلات باند 29 کیلودالتونی را نشان داد. نتیجه گیری: نتایج حاصل نشان داد که کلونینگ ژنgra7 در پلاسمید pcdna3 انجام شده و پلاسمید نوترکیب در سلول های یوکاریوتیک بیان گردیده است لذا، قابلیت آن را دارد که برای تحقیقات تهیه واکسن dna استفاده شود.